Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型白血病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现胰脏自身突变到再次出现1HG肾病临床研究病因的困难重重率在儿童初期就有比较好的描述，多个胰脏自身突变白血病的儿童之中有70%在抗体转换后10年内患上肾病，而随访15年的儿童这一比例缩减到84%。即便如此，分之一临床研究1HG肾病一半以上的HG1HG肾病的肺癌程序还并未想得到应有的深入研究。

越来越多的人开始用于有系统系统来假定1HG肾病的困难重重：性状在再次出现多种胰脏自身突变时踏入第1前期，再次出现食欲持续性时踏入第2前期，再次出现病因时踏入第3前期。一些多发胰脏自身突变白血病的性状，在1期和2期，困难重重较快，并工业发展为肺癌的1HG肾病。我们以后描述了一组成员在首次检测到多种胰脏自身突变试样后至多于10年无肾病的近于慢困难重重者，这组成员病患人数多于，但特点更加明确。随后，我们发现胰脏自身抗原特异性CD8+T细胞会反应在困难重重比较快的病患之中基本不不存在，但在近期肺癌和起因于的肾病病患之中很容易检测到。这可能声称，与困难重重病患相比较，这些病患自身免疫反应的调节提升。

早期深入研究声称，尽管调节性T细胞会(Treg)数量正常，但肾病病患不存在一些功能缺点，其之中包括对IL-2的反应能力降低。此外，肾病病患之中的现象CD4+T细胞会可能对调节更具抵抗性，平庸为现象T细胞会的减缓减弱，自然产生的Treg和排泄产生的作用于Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞会之中IL-2反应减弱。本深入研究的目的是描述了CD4+调节性T细胞会(Treg)在一小群近于比较快困难重重者之中的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX深入研究是一项以群体为基础的纵向深入研究，在21岁所列确诊的病患亲属之中核对1HG肾病的危险性因素。我们以后描述了长期比较快困难重重者的特点，他们保有多重胰脏自身突变白血病超过10年，但并未再次出现肾病的临床研究病因，慢性或非变性自身免疫。随后，10名在此之后保有无肾病并乐意缺多于大量血液试样的比较快困难重重者纳入T和B细胞会功能量化。在目前的深入研究之中，8名慢困难重重者(SP组成员)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身突变白血病。所有的发起者都正处于1HG肾病困难重重的1期，尽管一些人随后耗尽了胰脏自身突变对某些抗原的白血病反应，然而，一名病患已经正处于2期至多于6年，但并未再次出现临床研究病因，一名病患被病因为肾病，该患者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据量化之中对该丝氨酸完成了原则上指标。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，采行多实例流式细胞会术和T细胞会减缓试制指标丝氨酸之中Treg的Hz、变异和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复出)完成无监督聚类量化，指标Treg变异。

结果：与保健丝氨酸相比较，来自慢困难重重体的失忆CD4+T细胞会的监督聚类揭示，激来时的失忆CD4+ TregHz缩减，与糖皮质激素作用于的TNFR相关抗原(GITR)表述缩减有关。一名HbA1c消退的病患与困难重重比较快者和匹配的对照组成员相比较，Treg谱有所并不相同。功能量化声称，与保健丝氨酸相比较，来自比较快困难重重体的Treg酪氨酸的CD4+现象T细胞会减缓显著损坏。平庸为对现象CD4+T细胞会CD25和CD134表述的减缓缩减。

上图1 深入的变异量化揭示，CD4+Treg亚HG在慢困难重重路由表之中缩减。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的来时CD4+CD45RA -细胞会上。根据上面物表述鉴定出10个元簇:失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)用于9个并不相同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个节点象征性一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在节点组成员周遭上色。每个节点之中的碗上图回应单个上面的表述级别。(b)每个元聚类的热上图，以揭示整体上面表述。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成上图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的表层。(e-l)比较总质量为每个metacluster筒中央线上图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP组成员:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞会(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞会(l)。红色圆点象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用于CITRUS的预测模HG证实，TregHz的缩减是困难重重比较快的标志。评定除此以外(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞会上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的象征性性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述完成分离，实时FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及丝氨酸SP 606(红色)之中CD25+ cd127的Hz汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外子集的筒中央线上图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述气压着色，箭头凸显的簇被鉴别为SP和HD路由表之间的并不相同。(j)筒中央线上图揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员之中，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的比较总质量(比例)。(k)灰度揭示每个簇的变异(红色)和Treg上面比较表述与背景表述(红色);上列，内核Treg_3;后面一行，内核Treg_4。背景与所有其他簇之中上面的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验

上图3 与保健献血者相比较，困难重重比较快者失忆treg的GITR缩减。每个失忆CD4+T细胞会元簇(失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表述上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表述热上图(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表述相联，揭示灰度(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对标记秩和检验，p< 0.07(红色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(红色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表述，从评定除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)相联，揭示灰度(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩检验

上图4 来自比较快困难重重的CD4+ treg细胞会依靠现象CD4+T细胞会的能力降低。SP组成员用红色的中央线和圆点回应，HD组成员用红色的中央线和圆点回应，红色的中央线/圆点回应丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会完成分选。CD4+CD25−(；也者)被上面为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠来时化细胞会，培育3天后完成流式细胞会术检测。(a-d)与CD4+；也者比较应的treg培育(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培育。(a,b,f) CFSE作用于(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。用于白血病对照(激来时的响应细胞会不含treg)计算减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 现象CD4+T细胞会对比较快困难重重的T细胞会来时化的减缓更敏感。SP组成员用红色的中央线和圆点回应，HD组成员用红色的中央线和圆点回应，红色的中央线/圆点回应丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上面，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠来时化细胞会，培育3天后完成流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培育。(a,b) CFSE作用于(a)和CFSE减缓百分率(b)。(c,d) CD25减缓百分率(c)和CD134减缓百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们推论的正确性是，来自比较快困难重重子的来时化失忆CD4+Treg在GITR表述之中想得到了拓展和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1HG肾病风险性状之中的异质性的必要性。

文中注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28