Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的更进一步中逐渐扩展

从第一次显现胰脏自身抗原质到显现1M-肝炎医学疼痛的成效率在老年人时代就有很好的阐述，多个胰脏自身抗原质HIV的老年人当中有70%在血清转换后10年内身患肝炎，而随访15年的老年人这一%-减小到84%。远比，占医学1M-肝炎一半以上的M-1M-肝炎的发作机制还并未想得到更进一步的学奥义研究。

更为多的人开始采用分期系统来度量1M-肝炎的成效：有机质在显现多种胰脏自身抗原质时转至第1收尾，显现血糖异常时转至第2收尾，显现疼痛时转至第3收尾。一些多发胰脏自身抗原质HIV的有机质，在1期和2期，成效较太快，并转型为发作的1M-肝炎。我们之后阐述了一组成员在首次探测到多种胰脏自身抗原质取样后有数10年无肝炎的近于太快成效者，这组成员疼痛多人再加，但构造非常明确。随后，我们推断出新胰脏自身抗原质特异性CD8+T抗原反应该在成效近于快的疼痛当中基本上不存在，但在最近发作和依然存在的肝炎疼痛当中很容易探测到。这可能暗示，与成效疼痛相比之下，这些疼痛胃溃疡反应该的调控增强。

早期学奥义研究暗示，尽管调控性T抗原(Treg)为数正常人，但肝炎疼痛存在一些动态有缺陷，其当中包括对IL-2的反应该潜能降低。此外，肝炎疼痛当中的不稳定性CD4+T抗原可能对调控更具抵抗性，显出新为不稳定性T抗原的抑止逼近，人为产生的Treg和光阴质产生的抑止Treg，以及抗原质年中的CD4+T抗原当中IL-2反应该逼近。本学奥义研究的目的是阐述了CD4+调控性T抗原(Treg)在一小群近于近于快成效者当中的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学奥义研究是一项以人群为基础的侧向学奥义研究，在21岁表列住院的疼痛亲属当中检查1M-肝炎的危险因素。我们之后阐述了依然近于快成效者的构造，他们始终保持多重胰脏自身抗原质HIV超过10年，但并未显现肝炎的医学疼痛，太快性或非性动态胃溃疡。随后，10名继续始终保持无肝炎并愿意提供大量肠道取样的近于快成效者划定T和B抗原动态深入研究。在目前的学奥义研究当中，8名太快成效者(SP组成员)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身抗原质HIV。所有的发起者都位处1M-肝炎成效的1期，尽管一些人随后耗尽了胰脏自身抗原质对某些抗原质的HIV反应该，然而，一名疼痛仍然位处2期有数6年，但并未显现医学疼痛，一名疼痛被诊断为肝炎，该测试者72岁，在采集检验取样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究当中对该NADPH进行时了分开评核。分离外周血单个核抗原(PBMCs)，选用多参数流式抗原奥义和T抗原抑止试验评核NADPH当中Treg的高频率、表M-和动态。采用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)进行时无统筹聚类深入研究，评核Treg表M-。

结果：与健康NADPH相比之下，来自太快成效质的心灵CD4+T抗原的统筹聚类看出新，介导的心灵CD4+ Treg高频率减小，与阿托品抑止的TNFR相关抗原(GITR)强调减小有关。一名HbA1c增高的疼痛与成效近于快者和比如说的对照组成员相比之下，Treg对光有所不同。动态深入研究暗示，与健康NADPH相比之下，来自近于快成效质的Treg介导的CD4+不稳定性T抗原抑止引人注意破损。显出新为对不稳定性CD4+T抗原CD25和CD134强调的抑止减小。

上图1 深入的表M-深入研究看出新，CD4+Treg亚M-在太快成效路由表当中减小。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的光阴CD4+CD45RA -抗原上。根据标示物强调解剖出新10个元簇:心灵T抗原_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T抗原;HLA-DR + GITR +心灵T抗原;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)采用9个不同Treg标示分解成的10个元簇的MST。每个路由器代表一个坦克部队(100个坦克部队)，相当大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器组成员周围上色。每个路由器当中的饼上图问到单个标示的强调等级。(b)每个元聚类的热上图，以看出新整质标示强调。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)分解成上图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下稀土元素为每个metacluster装两条路点阵上图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T抗原(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T抗原(l)。蓝色带叔父代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组成员表示法秩检测。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 采用CITRUS的预测模M-猜测，Treg高频率的减小是成效近于快的字样。国际标准除此以外(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP发起者和比如说的HD发起者在CD4+CD45RA−T抗原上的关联性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR强调进行时分离，模拟FlowSOM人群。(b) HD(白点)和SP(黑斑)组成员以及NADPHSP 606(蓝色)当中CD25+ cd127的高频率汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外叔父集的装两条路点阵上图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度填充，箭头出新彩的簇被标识为SP和HD路由表之间的不同。(j)装两条路点阵上图看出新了在SP(黑斑)和HD(灰点)组成员当中，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相比之下稀土元素(%-)。(k)直方上图看出新每个簇的表M-(紫色)和Treg标示相比之下强调与取材强调(蓝色);上列，存储器Treg_3;下面正要，存储器Treg_4。取材与所有其他簇当中标示的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组成员表示法秩检测

上图3 与健康献血者相比之下，成效近于快者心灵treg的GITR减小。每个心灵CD4+T抗原元簇(心灵T抗原_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T抗原;HLA-DR + GITR +心灵T抗原;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个强调标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的强调热上图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇当中所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR强调串联，看出新直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon一组成员表示法秩和检测，p< 0.07(蓝色)所有NADPH包括，p< 0.05(蓝色)NADPHSP 606和比如说的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR强调，从国际标准除此以外，从所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，看出新直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组成员表示法秩检测

上图4 来自近于快成效的CD4+ treg抗原支配不稳定性CD4+T抗原的潜能降低。SP组成员用蓝色的两条路线和带叔父问到，HD组成员用银色的两条路线和带叔父问到，蓝色的两条路线/带叔父问到NADPHsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T抗原进行时分选。CD4+CD25−(接收者者)被标示为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠光阴化抗原，培育出新3过后进行时流式抗原奥义探测。(a-d)与CD4+接收者者相比之下应该的treg培育出新(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育出新。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑止比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止比例。采用HIV对照(介导的组成员织起来抗原则有treg)计算抑止比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 不稳定性CD4+T抗原对近于快成效的T抗原光阴化的抑止更引人注目。SP组成员用蓝色的两条路线和带叔父问到，HD组成员用银色的两条路线和带叔父问到，蓝色的两条路线/带叔父问到NADPHsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T抗原进行时分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标示，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠光阴化抗原，培育出新3过后进行时流式抗原奥义(CD25反染)和抗原因叔父深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培育出新。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑止调升(b)。(c,d) CD25抑止调升(c)和CD134抑止调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出新当中的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

断定结论：我们断定的断定结论是，来自近于快成效叔父的光阴化心灵CD4+Treg在GITR强调当中想得到了拓展和丰富，强调了进一步学奥义研究Treg在1M-肝炎高风险有机质当中的举例来说的必要性。

译者出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28